Ενότητες Εργασίας

Ενότητα Εργασίας 1

Διαχείριση Έργου

Συνεχής επικοινωνία μεταξύ των μελών της ερευνητικής ομάδας. Προετοιμασία του υλικού διάδοσης και των εκθέσεων αξιολόγησης των αποτελεσμάτων του έργου σύμφωνα με τις αρχές της επιστημονικής δεοντολογίας.

Ενότητα Εργασίας 2

Ορθολογικός σχεδιασμός ενώσεων (ανοσοκυρίαρχα πεπτίδια συζευγμένα με μαννοζυλιωμένα νανοσωματίδια)

Ορθολογικός σχεδιασμός των πεπτιδικών αναλόγων.
Επιλογή νανοσωματιδίων για την ενθυλάκωση (εγκλωβισμό) των πεπτιδίων.
Σχεδιασμός τροποποιημένων νανοσωματιδίων που στοχεύουν τον υποδοχέα μαννόζης των δενδριτικών κυττάρων (DCs).

Ο ορθολογικός σχεδιασμός των ενώσεων θα βασίζεται στο ακόλουθο τρίπτυχο:

Επιλογή ανοσοκυρίαρχου επιτόπου των πρωτεϊνων της μυελίνης
Επιλογή των νανοσωματιδίων.
Τροποποίηση της επιφάνειας των νανοσωματιδίων

Η τροποποίηση στην επιφάνεια των συμπολυμερών γαλακτικού και γλυκολικού οξέος [πολυ(γαλακτικό-γλυκολικό) οξύ, PLGA] στοχεύει στη σύζευξη με μονάδες μαννόζης που θα μπορούσαν να μεταφέρουν επιλεκτικά τα νανοσωματίδια, μαζί με το πεπτίδιο-αντιγόνο, στους υποδοχείς μαννόζης των δενδριτικών κυττάρων (DCs). Τα DCs είναι εκ των σημαντικών κυττάρων που εμπλέκονται στην εμφάνιση της Σκλήρυνσης κατά Πλάκας (ΣΚΠ).

Ενότητα Εργασίας 3

Σύνθεση πεπτιδίων, ανάπτυξη και ανάλυση τροποποιημένων νανοσωματιδίων

Σύνθεση και ταυτοποίηση πεπτιδικών αναλόγων με βάση ανοσοκυρίαρχους επίτοπους πρωτεινών της μυελίνης (Σχήμα 1).
Ανάπτυξη PLGA νανοσωματιδίων (ταυτοποίηση των φυσικοχημικών χαρακτηριστικών τους) (Σχήμα 2).

Η σύνθεση των πεπτιδίων θα πραγματοποιηθεί σε στερεή φάση επί της 2-χλωροτρυτιλοχλωριδίου ρητίνης

Η ανάπτυξη των PLGA νανοσωματιδίων [πολυ(γαλακτικό- γλυκολικό) οξύ], με ενθυλάκωση πεπτιδίων, θα πραγματοποιηθεί χρησιμοποιώντας τη μεθοδολογία διπλού γαλακτώματος με εξάτμιση διαλύτη (water-in-oil-in-water, w₁/o/w₂)

**Σχήμα 1: Γενική πορεία σύνθεσης πεπτιδών**

**Σχήμα 2: Συνθετική διαδικασία για την ανάπτυξη νανοσωματιδίων (NPs), με εγκλωβισμό πεπτιδίων.**
Η φάση w₁, περιέχει το πεπτίδιο διαλυμένο σε νερό, προστίθεται στην φάση που περιέχει το πολυμερές PLGA διαλυμένο σε DCM. Δύο φάσεις γαλακτωματοποιούνται με τη χρήση ομογενοποιητή και στη συνέχεια προστίθεται η φάση w₂ που περιέχει το επιφανειοδραστικό για την παραγωγή του δεύτερου γαλακτώματος. Τέλος, το γαλάκτωμα αφήνεται για εξάτμιση των διαλυτών και σχηματισμό των τελικών NPs.

Ενότητα Εργασίας 4

In vivo και in vitro αξιολόγηση συνθετικών μαννοζυλιωμένων νανοσωματιδίων – ανοσοκυρίαρχου πεπτιδίου της μυελίνης

In vivo Βιολογική/ανοσολογική αξιολόγηση συνθετικών μορίων.

Η in vivo αξιολόγηση θα πραγματοποιηθεί χρησιμοποιώντας το πειραματικό/ζωικό μοντέλο της ΣΚΠ, της Πειραματικής Αυτοάνοσης Εγκεφαλομυελίτιδας (EAE, ποντίκια C57BL/6), υπό την επίβλεψη της Δρ. Lesley Probert στο Ελληνικό Ινστιτούτο Παστέρ (Συνεργαζόμενος Οργανισμός). Όλα τα πειραματικά πρωτόκολλα in vitro / in vivo θα διεξαχθούν σύμφωνα με την «Ευρωπαϊκή Σύμβαση για την προστασία των ζώων που χρησιμοποιούνται για πειραματικούς ή άλλους ερευνητικούς σκοπούς» και θα εγκριθούν από την επιτροπή

Ενότητα Εργασίας 5

Διάδοσης και επικοινωνία των αποτελεσμάτων του έργου

Διάδοση, αξιοποίηση και αξιολόγηση των αποτελεσμάτων του έργου

Τα αποτελέσματα του έργου θα παρουσιαστούν σε εθνικό και διεθνές επίπεδο με σεβασμό και τήρηση των αρχών της επιστημονικής δεοντολογίας. Η διάχυση θα γίνει μέσω προφορικών ή αναρτημένων ανακοινώσεων σε επιστημονικά συνέδρια καθώς και δημοσιεύσεων σε επιστημονικά περιοδικά. Θα δημιουργηθεί ιστοσελίδα με στόχο την διάδοση των αποτελεσμάτων του έργου για πιθανή αξιοποίησή τους.